2.2. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ОСНОВНЫХ АЛКАЛОИДОВ ЧИСТОТЕЛА

2.2.1. Хелидонин. Хелидонин выделен впервые из травы чистотела в 1924 г. и в очищенном виде получен в 1839 г.

Хелидонин, гомохелидонин и метоксихелидонин являются митотическими ядами. Эта активность обусловлена, по-видимому, наличием в их молекуле стильбаминной группировки. Антимитотическое действие проявляется в концентрациях 1 мкг/мл культуральной жидкости. Цитостатическое действие их подобно колхицину.

Данные о противоопухолевой активности хелидонина противоречивы. Так, К. Бауэр указывает на отсутствие эффекта. Противоположные данные получены В. Соколовым. При введении в дозе 50—175 мг/кг на курс хелидонин эффективен при саркоме 180 и карциноме Эрлиха.

Торможение роста опухоли авторы связывают с токсическим действием препарата. Установлено, что наряду с незначительным противоопухолевым действием алкалоида при асцитных опухолях он угнетает процесс деления форменных элементов костного мозга, являясь митотическим ядом, задерживающим деление клеток в стадии метафазы.

При изучении фармакологической активности хелидонина обнаружено, что алкалоид действует на лягушек подобно морфину, без возбуждения, с последующим параличем центральной нервной системы. При отравлении наступает паралич мышц туловища и окончаний чувствительных и двигательных нервов, а также паралич двигательных узлов сердца. У теплокровных животных в смертельных случаях наблюдаются наркоз, подобно морфину, повышение рефлексов, паралич спинного мозга и окончаний чувствительных нервов. Пульс замедляется, благодаря поражению двигательных узлов и возбуждению блуждающего нерва. Кровяное давление не изменяется.

Работами ряда исследователей установлено антимикробное действие хелидонина. Его бактерицидные свойства обнаружены в отношении золотистого стафилококка и неспоровых форм сибирской язвы.

В. Г. Дроботько, Б. Е. Айзенман и др. обнаружили незначительную активность этого алкалоида в отношении стафилококков, некоторых других грамположительных бактерий и туберкулезной палочки; на грамотрицательные микробы и плесневые грибки его действие почти отсутствует. Хелидонин замедляет также развитие эпидермофитона Кауфмана—Вольф—Пристли.

В лечебной практике Польши хелидонин применяется в таблетках в виде солей (гидрохлорид, сульфат, фосфат, таннат) по 0,1—0,2 г в день при заболеваниях желудочно-кишечного тракта и в качестве спазмолитика при бронхиальной астме. В виде мази «Хелифунгин» алкалоиды чистотела применяются как фунгицидное средство, а мазь «Хеливаг», основным действующим веществом которой является сангвинарин, успешно используется для лечения трихомонадных кольпитов. Наркотическое действие хелидонина нашло применение в педиатрии. В Австрии выпускается противоопухолевый препарат «Украин».

2.2.2. Берберин. Этот алкалоид, относящийся к наиболее распространенным в природе, впервые выделен из растения Xautoxylon clava. Сейчас берберин обнаружен в различных растениях, принадлежащих к пяти отдаленным семействам: маковым, лютиковым, барбарисовым, рутовым и луносемянниковым. В химическом отношении берберин является производным изохинолина и состоит из изохинолинового кольца, которое сконденсировано с двумя бензольными.

По данным А. Д. Туровой и соавт., берберин в качестве горечи, улучшающей пищеварение и аппетит, а также кровоостанавливающего средства при маточных кровотечениях применялся в отечественной медицине с середины XIX в. В больших дозах его употребляли как нежное слабительное. Позднее в Китае этот алкалоид начали применять при бактериальной дизентерии.

Фармакологические свойства берберина. Особенности фармакологического влияния берберина фундаментально изучались. Выяснилось, что этот алкалоид имеет умеренно выраженную токсичность; явления отравления развиваются постепенно, достигая максимума через 3—6 дней, при этом нарастает вялость, появляется угнетение вплоть до прострации. Смерть наступает от остановки дыхания и угнетения сердечной деятельности. Внутривенное введение алкалоида сначала вызывает ускорение ритма дыхания и сердцебиение, падение артериального давления, резкое усиление сократительной деятельности мышц матки и кишечника. При исследовании электрокардиограммы отмечается сокращение продолжительности интервала Т=Р и P = Q, уменьшение амплитуды зубца Р и увеличение зубца Т.

Берберин имеет также обезболивающие свойства, несколько угнетает нервные ганглии, вызывает ритмичные сокращения селезенки, повышает диурез. Этот алкалоид вызывает сужение периферических сосудов изолированного уха кролика, ослабляет действие адреналина на периферические сосуды и артериальное давление, усиливает депрессорную реакцию в ответ на введение ацетилходина, но не влияет на ацетилхолиновый спазм кишечника.

К. Д. Драке и В. И. Кирютина, изучая фармакологические свойства препаратов из бархата амурского, который содержит 2—6 % берберина, подтвердили существующие данные о фармакологическом действии берберина и установили, что наиболее чувствительной к его влиянию является матка взрослых кошек, тонус которой резко возрастает. Об этой особенности влияния берберина на сокращение мышц матки морских свинок и кошек сообщил также З. Супек, который считает этот алкалоид более активным, чем гидрастин.

С. В. Ивасивкой определена ЛД₅₀ бисульфата берберина, которая для мышей при внутрибрюшинном введении составляет по Керберу 21 мг/кг, а для крыс 44 мг/кг. Особенности влияния разных доз препарата при различных путях его введения изучены А. Д. Туровой с соавт.. Даже однократное введение 25 мг/кг сульфата берберина кошкам внутрь вызывало угнетение, адинамию и вялость животных. Эти явления развивались через 50—60 мин после приема препарата и исчезали лишь через 6—8 ч. Увеличение дозы алкалоидов вдвое вызывало усиление проявления упомянутых явлений угнетения, появлялись слюнотечение и рвота, которые исчезали лишь через сутки. Применение дозы 100 мг/кг привело к острому отравлению животных, которые погибли через 6—8 сут.

Аналогичная закономерность действия берберина наблюдалась и при ином пути его введения — внутривенном. При этом проявления токсического влияния отмечены после применения меньших доз (10—15 мг/кг), однако нормализация также наступала раньше. Лишь при введении препарата в дозе 50 мг/кг наблюдалось серозно-геморрагическое воспаление слизистой тонкого и толстого кишечника, а также желтая окраска слизистых и серозных оболочек.

При продолжительном ежедневном введении берберина внутрь в дозе 0,25 мг/кг на протяжении 10 дней видимых токсических явлений не было. Не отмечено также и изменений структуры внутренних органов, наблюдалось лишь сокращение круговых мышц кишечника. Даже применение внутрь 25—50 мг/кг одномоментно не вызывало изменений строения внутренних органов. И лишь от дозы 100 мг/кг возникали истощение животных, серозно-геморрагическое воспаление слизистой кишечника, а также проявлялись желтая окраска слизистых и серозных оболочек, сильное сокращение круговых мышц кишечника.

При подкожном введении смертельных доз алкалоида зафиксированы симптомы отравления уже через 2—5 мин. Они выражались в следующем: вялость и учащение дыхания с последующим прекращением дыхательных движений,

затем животные переходили в состояние полной прострации с исчезновением болевой чувствительности. Смерть наступала от введения 0,02—0,1 г/кг алкалоида. Сердце при вскрытии продолжало сокращаться.

Установлено, что смерть при внутривенном введении берберина у белых мышей наступает при дозе 0,5—1,0 мг/кг, а у кроликов—10—20 мг/кг. При подкожном введении препарата кроликам смертельной дозой для ник является 100 мг/кг, что подтверждает.

При внутривенном введении берберина крысам гибель наступала от 0,25 мг/кг, кошки и собаки погибают от 25 мг/кг. По М. А. Шуринову смертельной дозой для собаки при внутривенном введении являлось 50 мг/кг.

Л. Н. Селивановой определены следующие максимально смертельные дозы: ЛД₁₀₀ для мышей равна при внутривенном введении 1,5 мг/кг, при приеме внутрь 200 мг/кг, при подкожном—15 мг/кг. ЛД₁₀₀ для кроликов составляет 30 мг/кг при внутривенном введении; для кошек— 40 мг/кг при внутривенном введении и 100 мг/кг — при подкожном введении. Эти данные отличаются от результатов предыдущих авторов.

При нанесении на неповрежденную кожу берберин не оказывает местного действия. 1%-й раствор не действует на конъюнктиву глаза кролика и не изменяет корнеальный рефлекс. При подкожном и внутривенном введении кошке и кролику воспаление не наступает. Микроскопические исследования показали эксудацию лимфы между мышечными волокнами, расширение кровеносных сосудов.

Изучено влияние солянокислой соли берберина на млекопитающих и птиц (голуби и куры). Алкалоид вводился птицам в зоб в виде концентрированного раствора или с кормом в виде пилюль по 0,25 г в течение 4—5 дней, а в последующие 3 дня — по 0,5 г. Существенных изменений общего состояния не наблюдалось.

Характерным действием берберина на кровообращение различных животных (кролики, кошки и собаки) является снижение кровяного давления, степень которого и время восстановления зависят от применяемой дозы. На изолированное сердце холодно- и теплокровных животных берберин действует в небольших дозах стимулирующе, а в больших — угнетающе.

Желчегонное действие. В острых опытах на кошках и хронических опытах на собаках изучено желчегонное влияние берберина при внутривенном и оральном введениях. В опытах на кошках отмечена четкая корреляция между дозой препарата и желчегонным влиянием. Более фундаментально этот эффект препарата в виде хлористоводородной соли при применении внутрь исследовал Б. А. Вартазарян в опытах на собаках с перевязкой желчного протока и без нее. Кроме общего количества желчи изучались сухой остаток, концентрация органических и неорганических веществ, удельный вес.

При наличии свободного желчного протока применение берберина в дозе 1 — 5 мг/кг вызывало лишь некоторое разжижение желчи. В то же время после перевязки желчного протока введение берберина в дозе 1 мг/кг приводило через сутки к заметному увеличению количества желчи и ее разжижению. Этот эффект длится до 15 дней. Интересно отметить, что максимально выраженный эффект наблюдался после длительного применения препарата (табл. 1, 2).

В хронических опытах на собаках алкалоид угнетал двигательную функцию желчного пузыря, что может иметь лечебное значение при холециститах.

Полученные данные нашли применение в клинике, где берберин с успехом применяется при заболеваниях желчных путей.

Л. А. Лещинский, Т. Б. Варфоломеева и др. применили у 61 больного с хроническими воспалительными заболеваниями желчных путей берберин в дозе 20 мг три раза в день внутрь на протяжении 10 дней. У 19 больных отмечено значительное объективное и субъективное улучшение, у 26 — улучшение и 20 — эффекта не наблюдали. Обнадеживающие результаты получены также при лечении берберином больных язвенной болезнью 12-перстной кишки.

Берберин бисульфат утвержден Фармакологическим комитетом к медицинскому применению в нашей стране в качестве желчегонного средства. Как желчегонный препарат утвержден также комплексный препарат «холелитин», в состав которого входит настойка барбариса и чистотела.

Противоопухолевое и антимикробное действие бербврина. Немецкие ученые установили угнетающее действие берберина на рост тканевых культур карциномы Эрлиха и подтвердили слабые кариобластические свойства алкалоида. Обнаружена способность берберина подавлять ферментные системы, участвующие в дыхании опухолевых клеток, при стимуляции гликолиза. Получены аналогичные данные об отсутствии выраженного влияния алкалоида на митотическую активность клеток асцитных опухолей. Подчеркивается также его значение как дыхательного яда.

Сульфат берберина специфически окрашивает ДНК и используется в люминесцентной микроскопии. Наблюдалась способность берберина задерживать рост золотистого стафилококка и ряда других патогенных микробов.

В последние годы интенсивно развиваются исследования по химической модификации берберина с получением биологически активных веществ направленного действия. Некоторые из них имеют выраженную противоопухолевую активность в эксперименте.

2.2.3. Сангвинарин. Фармакологические свойства, В 1892 г. впервые установлено, что сангвинарин угнетающе действует на нервную систему холодно- и теплокровных. Подобно хелидонину и β-гомохелидонину, алкалоид вызывает напоминающий вызванный морфином сон.

При обобщении данных по фармакологии сангвинарина указывается на то, что этот алкалоид проявляет слабое наркотическое действие, подобно стрихнину вызывает возбуждение ЦНС, а в больших дозах приводит к параличу. Отмечается также местное раздражение, которое происходит от паралича чувствительных нервных окончаний. Препарат усиливает перистальтику кишечника и слюноотделение. Смерть от токсических доз наступает при явлениях паралича дыхания.

Э. А. Эдельштейн указывает на наркотическое действие сангвинарина, которое сходно с действием алкалоидов опия. Оно выражайся в угнетении дыхательного центра, больших полушарий головного мозга и волевых центров. В опытах на кроликах изучено действие на внутриглазное давление и влияние на зрачок 16 различных алкалоидов, в том числе протопина, криптопина, берберина, сангвинарина и хелидонина. При внутривенном введении кролику массой 2,5 кг 0,008 г сангвинарина наблюдалось повышение внутриглазного давления и мидриаз. Установлено, что эти вещества влияют на экстрапирамидальную систему и промежуточный мозг.

Внутривенное введение 5—15 мг/кг хелидонина, за которым следовало введение 20—30 мг/кг сангвинарина, повышает тонус сосудов и кровяное давление, усиливает перистальтику кишечника, вызывает уплотнение селезенки у подопытных животных (мыши, кролики, лягушки, собаки и кошки). Действие 100 мг адреналина на кровяное давление почти полностью подавляется хелидонином и сангвинарином. Эта комбинация обладает симпатолитическим эффектом, отчетливым местным обезболивающим действием, но менее выраженным, чем у дикаина.

Сангвинарин вызывает у обезьян повышение внутриглазного давления, а также дефицит цистеина. Эти же авторы определяли сангвинарин в молоке животных.

Кроликам массой 2,5—3,0 кг в период лактации вводили 4—8 мг сангвинарина гидрохлорида, а спустя 4 ч — 5— 10 Ед окситоцина. Методом хроматографии на бумаге установлено, что сангвинарин находится в связанном состоянии с альбуминовой фракцией молока. В таком же виде алкалоид находится в плазме крови крыс, кошек и обезьян. В печени сангвинарин превращается в продукт, обладающий зеленой флуоресценцией, вероятно, в 3,4-бензакридин. Этот продукт удалось выделить из мочи кроликов, получавших ежедневно по 8 мг гидрохлорида сангвинарина на протяжении месяца. Вместе с 3,4-бензакридином в молоке и моче находятся еще другие не идентифицированные флуоресцирующие метаболиты сангвинарина.

Исследованиями Б. С. Никольской, Э. А. Эдельштейна, Н. А. Крышовой и соавт. установлено, что сангвинарин обладает способностью снижать активность холинэстеразы и повышать чувствительность организма к ацетилхолину, восстанавливая нервно-мышечную проводимость. Алкалоид повышает тонус гладкой мускулатуры кишечника и беременной матки животных.

Внутривенное введение белым мышам алкалоида в дозе 6—12 мг/кг вызывает уменьшение двигательной активности животных. Реакции на болевой и звуковой раздражитель у мышей полностью сохраняются. Повышение дозы до 25 мг/кг сопровождается токсическими влияниями и гибелью более половины животных. При дозе 37,5 мг/кг все подопытные животные погибают.

ЛД₅₀ сангвинарина при расчете по Керберу составляет 19,4 мг/кг. По данным нашей лаборатории, ЛД₅₀ гидрохлорида сангвинарина при внутрибрюшном введении по Керберу равна 12,5 мг/кг.

Хелеритрин и сангвинарин проявляют специфическое токсическое действие. Длительное применение этих препаратов вызывает глаукому. В связи с этим, фармакогностическая Подкомиссия Польши запретила свободную продажу травы чистотела.

Антимикробное и антифунгальное действие. Хелеритрин-сангвинариновая смесь проявляет выраженное бактерицидное действие на стафилококки и неспоровые формы сибирской язвы. Имеются сведения об активности смеси сангвинарина с хелеритрином в разведении 1 : 50 000.

С. А. Вичканова и М. А. Рубинчик выявили слабо выраженную химиотерапевтическую активность сангвинарина при введении внутрь в случае стафилококкового сепсиса белых мышей, которая выражается в некотором удлинении сроков выживаемости леченных животных по сравнению с контролем. Указывается, что сангвинарин проявляет антибактериальное действие в отношении туберкулезной палочки.

При изучении туберкулостатического действия некоторых алкалоидов, в том числе хелидонина, протопина, берберина и сангвинарина, оказалось, что оно незначительно. Методом хроматографии на бумаге установлено, что алкалоиды сангвинарин и хелеритрин угнетают размножение азотобактерий. При исследовании алкалоидов флуоресцентномикроскопическим методом показано, что жизненно важные ферментные процессы избирательно концентрируются в хондриосомах.

Был установлен широкий спектр антимикробной активности сернокислой соли сангвинарина, вызывающей задержку развития грамположительных, в том числе антибиотикоустойчивых и грамотрицательных бактерий, патогенных грибков, паразитических простейших. Антибактериальный эффект препарата снижается в присутствии 10 % нормальной лошадиной сыворотки в 2—8 раз.

Эффективность сангвинарина при местном применении была изучена на модели локализованной гнойной инфекции кроликов, развивающейся при внутрикожном заражении стафилококком и его ассоциацией с кишечной палочкой. Алкалоид в виде эмульсии оказывает выраженное лечебное действие при локализованной гнойной инфекции, вызванной грамположительным и чувствительными и устойчивыми к пеницилину микроорганизмами, а также ассоциацией их о грамотрицательной микрофлорой. Протистоцидное действие препарата, изученное методом висячей капли, в отношении 2 свежевыделениых штаммов Trichomonas vaginalis наблюдалось при воздействии 0,5%-го раствора сангвинарина через 10—15 мин контакта. Аналогичные данные указывают на то, что хелидонин, протопин и особенно сангвинарин задерживают in vitro рост эпидермофитона Кауфман—Вольф—Пристли при концентрации 716 мкг/мл. Более чувствительным к алкалоидам чистотела является Epidermophyton inguihale.

2.2.4. Клиническое применение алкалоидов чистотела. Препарат «Хеливаг» (Польша), содержащий алкалоид сангвинарин, применяется для лечения трихомонадных кольпитов. Эффективность лечения достигает 85%. Р. Е. Касатикова показала выраженный лечебный эффект сангвинарина при кольпитах и эрозиях шейки матки.

Эффективны растворы сангвинарина при лечении парадонтоза, 1%-я эмульсия оказывает выраженное терапевтическое действие при заболеваниях слизистой оболочки полости рта, сопровождающихся образованием эрозии и язв. Сангвинарин быстро приводит к ликвидации воспалительных явлений и способствует эпителизации эрозийных и язвенных поверхностей.

1 %-я водная эмульсия сульфата сангвинарина изучалась при лечении различных дерматозов, в том числе микробной экземы. Клиническое излечение у больных наступало на 7— 8-й день после применения препарата. Эмульсия не вызывает побочных явлений и может применяться в комплексной терапии больных с осложнениями аллергическими дерматозами как эффективное антимикробное средство, не вызывающее аллергических реакций.

Г. П. Зайцев применил для лечения гнойных и трофических язв 1%-ю эмульсию сангвинарина. Из 22 больных полное излечение и улучшение общего состояния под влиянием препарата наступило у 19. Поэтому сделан вывод о целесообразности применения 10%-й эмульсии сангвинарина в хирургической практике.

В. Я. Кунельской проведено изучение действия сангвинарина при лечении больных хроническими средними и наружными отитами. Применялся 0,2%-й спиртовой раствор сульфата сангвинарина и 1%-й водный раствор с аскорбиновой кислотой. Препарат оказался достаточно эффективным при лечении наружных отитов и консервативной терапии больных, страдающих хроническим гнойным средним отитом.

В Институте физиологии им. И. П. Павлова Н. А. Крышовой проводились исследования лечебного эффекта сангвинарина у больных с некоторыми органическими заболеваниями нервной системы с учетом основной особенности препарата— способности снижать активность холинэстеразы и повышать чувствительность к ацетилхолину с восстановлением нервно-мышечной проводимости. Сангвинарин применялся при различных формах миопатий. Больные получали препарат в таблетках по 0,01 в течение 20 дней. Из 27 человек улучшение наступило у 20, что свидетельствует о значительном лечебном эффекте препарата при этой тяжелой и практически неизлечимой болезни.

Алкалоид сангвинарин эффективен при различных формах прогрессивной мышечной дистрофии, особенно миопатии, последствиях гемолитической болезни новорожденных с грубыми церебральными параличами, при спастических парезах вследствие родовой травмы.

Фармакологическим Комитетом Министерства здравоохранения в качестве антимикробного средства для наружного применения утвержден препарат «сангвиритрин», представляющий собой смесь сернокислых солей двух алкалоидов чистотела — сангвинарина и хелеритрина — в соотношении примерно 1 : 1.

Следовало бы ожидать, что положительные результаты обстоятельного изучения разностороннего терапевтичесного, в том числе и противоопухолевого, действия галеновых и неогаленовых препаратов чистотела и выделенных из него алкалоидов в эксперименте, а также многочисленные клинические наблюдения должны были бы привести к более широкому их клиническому испытанию в специализированных учреждениях. Тем не менее этого не произошло. Препараты чистотела хотя и включены в схему патогенетической терапии опухолей, предложенную профессором И. Т. Шевченко, но углубленное клиническое изучение противоопухолевых свойств чистотела пока не проводится.

Учитывая данные о тропизме алкалоидов чистотела к опухолевой ткани, мы использовали сумму и отдельные алкалоиды этого растения для получения продуктов алкилирования их тиофосфамидом. Так был получен продукт взаимодействия суммы алкалоидов (препарат «амитозин»), хелидонин-тиофосфамид, берберин-тиофосфамид и сангвинарин-тиофосфамид. Характеристика их биологической активности будет представлена во второй части работы. Для более тщательного знакомства с показаниями и противопоказаниями к применению препаратов чистотела при разных болезнях, а также особенностях дозировок и схем лечения в следующем разделе приводятся сведения об использовании этого растения в современной медицине.

А.И.Потопальский
Препараты чистотела в биологии и медицине