5.4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ АМИТОЗИНА

5.4.1. Опыты in vitro. В контактных опытах по методике Шрека изучено действие препарата на асцитные варианты карциномы мышей Эрлиха и лимфомы NK/Ly (табл. 21). Статистически достоверное увеличение количества погибших клеток наблюдается при введении амитозина в концентрации 20 мкг/мл. Увеличение концентрации препарата сопровождается равномерным нарастанием процента погибших опухолевых клеток обоих штаммов.

При трансплантации суспензии опухолевых клеток карциномы мышей Эрлиха после такого контакта с амитозином в концентрации 1 мг/мл отмечено замедленное развитие опухоли. Так, на 18-й день после трансплантации средний диаметр опухолей животных контрольной группы достиг 2,35 см³ при 1,25 см³ в опытной группе. У 20 % подопытных животных трансплантация опухоли была безуспешной.

Исследовали также противоопухолевую активность препаратов в опытах in vitro по методике Чернова В. А.. Для этого асцитическую жидкость смешивали с раствором испытуемого препарата в разных разведениях. Смесь инкубировали в термостате 2—4 ч. После этого асцит смешивали с 2%-м раствором эозина и под микроскопом определяли процент поврежденных (окрашенных) клеток.

Для оценки эффективности препаратов использовали также тест на прививаемость. Взятую непосредственно из брюшной полости животных асцитическую жидкость смешивали с препаратом в концентрации 1 мкг/мл и после инкубирования в термостате на протяжении 2 ч и последующего отмывания прививали подопытным животным Использование метода изучения действия амитозина путем подавления активности дегидрогеназ опухолевых клеток также подтвердило наличие противоопухолевой активности амитозина в значительных разведениях при большинстве штаммов опухолей (табл. 22).

Из полученных данных видно, что тиофосфамид обладает примерно той же направленностью действия, что и амитозин, но мало активен, а сумма алкалоидов чистотела в большинстве случаев не эффективна.

В опытах на мутантах стафилококка 209 с дефектом дыхания УФ-2 и УФ-3 амитозин в концентрации 6 мг/мл оказал бактерицидное действие на мутанты, не действуя на исходный штамм стафилококка. В культуре клеток карциномы Эрлиха эта концентрация приводит к уменьшению прироста клеток.

5.4.2. Действие амитозина на экспериментальные опухоли животных. Сравнительное изучение амитозина и использованных при его получении веществ проведено в опытах на крысах и мышах. Данные о спектре противоопухолевого действия амитозина в стандартных условиях опыта представлены в таблице 23.

Результаты опытов свидетельствуют о наличии у препарата свойственного ему спектра специфического действия. Наиболее эффективен амитозин при гомоцитобластозе крыс, а также при саркоме-37, лимфоме NK/Ly и карциноме Эрлиха у мышей.

На малочувствительных к тиофосфамиду моделях опухолей мышей подтверждена более высокая противоопухолевая активность амитозина по сравнению с составляющими его компонентами, вводимыми раздельно, а также в виде механической смеси (табл. 24). Отмечено, что сумма алкалоидов чистотела и тиофосфамид при лимфоме NK/Ly и саркоме-37 не проявляют достоверной активности, а амитозин обладает выраженным противоопухолевым действием. Активность всех препаратов при карциноме Эрлиха примерно одинаковая.

Зависимость противоопухолевого эффекта препарата от доз и схемы введения представлена в таблице 25. Выявлено, что при карциноме мышей Эрлиха и саркоме-37 эффективность амитозина колеблется от 52,67 до 61,25 % и от 72,7 до 79,7 % и мало зависит от доз и схемы введения. При лимфосаркоме ЛИО-1 наиболее активен препарат при введении его в дозе 100 мг/кг ежедневно или через день. Особенно заметна разница эффективности разных доз в опытах с меланомой Гардинг—Пасси, при которой удается в оптимальных условиях опыта повысить эффект более чем в 2 раза.

Противоопухолевая активность амитозина при «запущенных» опухолях также зависит от скорости их роста и чувствительности к препарату. Так, при чувствительном гемоцитобластозе крыс Швеца, скорость роста которого наиболее выражена в первые дни после трансплантации, заметна отчетливая разница в эффекте при начале лечения на 2-й и 6-й день. В опытах с ранним введением амитозина удается достичь полного излечения подопытных животных. Увеличение срока начала лечения сопровождается снижением активности (табл. 26).

В то же время даже при поздних сроках начала лечения таких опухолей, как карцинома Герена и карциносаркома Уокера, противоопухолевое действие амитозина достаточно выражено. Эффект препарата при позднем сроке начала лечения гепатомы крыс РС-1 почти не зависит от увеличения дозы.

В опытах с высокочувствительной к препарату моделью гемоцитобластоза крыс Швеца определена эффективность амитозина в зависимости от способа введения.

При оральном введении препарата в виде нерастворимой взвеси на дистиллированной воде противоопухолевого действия не отмечено. В то же время применение растворенного амитозина на универсальном растворителе приводит к торможению роста опухоли на 60—70 %.

Используя эту модель, удалось установить, что амитозин эффективен и при внутриглазном способе инокуляции бластомы, что подтверждает его проницаемость через гемато-офтальмический барьер.

На модели метастазирующей карциномы Герена при трансплантации опухоли в яичко установлено, что внутривенное и внутрибрюшинное введение максимально переносимых доз амитозина спустя 24 ч после инокуляции уменьшает количество метастазов на 45—65 %.

Изучение действия амитозина на асцитных формах опухолей мышей Эрлиха и NK/Ly свидетельствует о его влиянии лишь на концентрацию опухолевых клеток при отсутствии противоопухолевого эффекта, определяемого по общему объему асцита (табл. 27). Сопоставляя количество опухолевых клеток с объемом асцита, следует отметить тенденцию к увеличению количества асцита и вызванное этим уменьшение концентрации опухолевых клеток за счет разжижения.

Во всех терапевтических опытах препарат, в отличие от тиофосфамида, не угнетает кроветворение (табл. 28), а в минимальных терапевтических дозах, равных 1/10 и 1/6 ЛД₅₀, приводит даже к увеличению количества лейкоцитов в периферической крови.

Не обнаружено выраженного угнетающего действия амитозина на показатели периферической крови и на моделях лейкозов мышей. В этих опытах под влиянием амитозина происходит нормализация лейкоцитов, количество которых приближается к цифрам, характерным для интактных мышей (см. табл. 28).

А.И.Потопальский
Препараты чистотела в биологии и медицине