5.6. АНТИМИКРОБНАЯ И АНТИВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ АМИТОЗИНА

Изучение антимикробной активности алкалоидов барбариса и чистотела и их тиофосфамидных производных свидетельствует о слабо выраженном бактериостатическом эффекте алкалоидов хелидонина и берберина в концентрации 1 мг/мл на штаммы кишечной палочки 0—111, дизентерийной палочки Зонне и стафилококк-209. Мутанты последнего— штаммы УФ-2 и УФ-3 — более чувствительны. Бактериостатическая концентрация для них: хелидонина 1 мг/мл, берберина 25 и 14 мкг/мл.

Сумма алкалоидов чистотела, продукт их модификации тиофосфамидом — амитозин, продукт модификации берберина тиофосфамидом — трибетамид и сам алкилирующий агент — тиофосфамид действуют бактерицидно в концентрации 1 мг/мл только на мутант стафилококка УФ-3. На мутант УФ-2 наиболее активно действуют продукты модификации алкалоидов — амитозин и трибетамид (0,2 мг/мл), бактерицидная концентрация тиофосфамида — 0,67 мг/кг, а суммы алкалоидов чистотела — 1 мг/мл.

Избирательное действие изученных препаратов на мутанты стафилококка подтверждает целесообразность использования их в работах по первичному отбору противоопухолевых веществ.

Противовирусное действие амитозина изучали на моделях: вируса гриппа, инфекционного ларинготрахеита и энтерита свиней.

Оценку противовирусной эффективности препаратов проводили по двум показателям: степени протективного действия препарата у куриных эмбрионов в контрольной и опытной группах, среднегеометрическому титру вируса в аллантоисной жидкости контрольных и подопытных эмбрионов, определяемому в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

С целью испытания химиотерапевтического действия препаратов на модели гриппозной пневмонии мышей заражали интраназально различными дозами вируса. Препараты вводили подкожно через 2 и 24 ч после заражения. Курс лечения составлял 5 ежедневных инъекций. Изучено также влияние препаратов на инфекционные свойства вируса гриппа после 1-часовой экспозиции его с препаратом. Активность испытываемых веществ определяли по выживаемости мышей, средней продолжительности их жизни и степени специфического поражения легочной ткани (табл. 35 и 36).

Изучение влияния исследуемых препаратов на вирус гриппа в опытах in vitro (с последующим заражением этой смесью мышей) показало инактивирующее действие их на указанного возбудителя. Установлено, что экспозиция препаратов с вирусом нейтрализует инфекционные свойства вируса, о чем свидетельствуют показатели средней продолжительности жизни животных опытных групп, инфицированных инокулюмом, обработанным соответственной дозой препарата, и мышей, инфицированных нативным вирусом. Препараты оказывали вирулицидное действие как на одну, так и на 10 летальных доз. Разница исследуемых показателей установлена с достоверностью 99,9 %.

Следует отметить, что вирулицидная активность препаратов не зависела от штамма вируса. Изменения в легочной ткани мышей, инфицированных смесью «вирус-препарат», в основном были незначительными. Лишь в отдельных случаях они оценивались на два плюса в контроле — явлениях тотальной пневмонии у мышей, инфицированных смесью «вирус-растворитель». Самый высокий процент выживания (60) отмечен при использовании амитозина в дозе 0, 5 мг/мл.

Полученные данные послужили основой для определения профилактического эффекта указанных продуктов на мышах с гриппозной пневмонией (табл. 37). При данных условиях опыта было выявлено терапевтическое действие у продукта конденсации хелидонина с тиофосфамидом: при лечении мышей, зараженных одной смертельной дозой вируса гриппа А /Бетезда/ H₃N₂, установлен защитный эффект, о чем свидетельствуют 100%-е выживание, общее состояние животных, а также отсутствие,изменений в легочной ткани.

Что же касается амитозина и суммы алкалоидов, то их профилактическое действие выражено степенью достоверности в 99 и 95 %. По мере увеличения инфицирующей дозы возбудителя выраженность активности препаратов падает. Однако отмечена разница в степени интенсивности пневмоний у леченых и нелеченых мышей. Сравнительное изучение действия препаратов по отношению к другому штамму вируса гриппа — А /Англия/ H₃N₂ — показало (см. табл. 37), что в этих условиях опыта хелидонинтиофосфамид, амитозин и сумма алкалоидов проявляют антигриппозную активность при инфицирующей дозе 1 ЛД₁₀₀ с вероятностью разницы по отношению к контрольным животным в 99,9 % (т. е. Р<0,001).

В данном случае активность препаратов также зависела от дозы вируса, с помощью которой воспроизводили модель. Установлено снижение количества пневмоний и их интенсивности под влиянием лечения по сравнению с нелечеными мышами, где была отмечена характерная сливная гриппозная пневмония. Диагноз подтверждается вирусологически — методом пассажей легочной суспензии на куриных эмбрионах и в РГА (табл. 38, 39). Как видно из приведенных данных, в 100 % случаев из легких контрольных мышей выделен вирус в высоких титрах (после пассажа in ovo), а у мышей, подлежащих химиотерапии, не удалось выделить во всех случаях вирус гриппа методом пассажей. Снижение титров в РГА с легочной суспензией леченых мышей также свидетельствует о торможении репродукции вируса под влиянием исследуемых препаратов.

С целью установления терапевтического действия тиофосфамидных производных алкалоидов чистотела была проведена серия опытов с использованием препаратов через день от момента заражения. Получены результаты, подобные описанным выше, но при этом наблюдалась тенденция к снижению активности применяемых в эксперименте веществ. Последнее обстоятельство дает основан не считать, что активность зависит от времени начала лечения— раннее начало лечения дает более выраженный эффект (табл. 40).

Совместно с кафедрой птицеводства и болезней птиц Московской ветеринарной академии проведено изучение противовирусной активности препарата амитозина на модели вируса инфекционного ларинготрахеита птиц (ИЛТ).

Использованы куриные эмбрионы 9—10-дневной инкубации, которых заражали вакцинным вирусом ИЛТ, штамм ЦНИИПП в дозе 100 ЭИД₅₀. Эмбрионы заражали вирусом одномоментно с препаратом без предварительного их контакта и после 30-минутного контакта вируса с препаратом при Т + 6°С. Контрольными группами служили зародыши, которым вводили либо только вирус инфекционного ларинготрахеита, либо только препарат амитозин, либо только растворитель. Установлен противовирусный эффект.

Исходя из приведенных данных, следует отметить, Что хелидонинтиофосфамид, а также амитозин и сумма алкалоидов вызывает интерес как препараты с противовирусным действием. Представляется целесообразным продолжить изучение их действия, применительно к различным моделям вирусных инфекций с целью установления спектра терапевтического действия и расширения ассортимента противовирусных средств.

А.И.Потопальский
Препараты чистотела в биологии и медицине